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寡糖的特性及其在动物饲料中的应用研究
2018/4/26 16:56:07

众所周知,抗生素作为促生长型添加剂被广泛应用于畜牧业的大幕被逐步拉下,抗生素对人类构成严重潜在威胁的负面作用——药物残留、二重感染、耐药菌株的产生、正常微生态环境平衡的破坏、畜禽免疫力的降低,及畜禽产品中药物残留可能导致人类DNA结构的改变,从而造成“致残”、“致畸”、“致癌”等严重后果的现象,已经日益凸显。因此,越来越多的国家和地区已经制定出台了相应的政策和法规对养殖业中抗生素的使用加以限制和规范。从而,拉开抗生素替代品研发的序幕就显得尤为迫切。


随着对畜禽胃肠道正常微生物的组成、定植规律及其与宿主关系研究的日益深入,通过调节动物肠道微生物区系来改善动物的健康状态,增强机体潜在的抗病力已经成为了动物营养领域探讨的热点。其中,寡糖被作为一种理想的抗生素替代品的研究受到了高度的重视。寡糖Oligosaccharides),又名:低聚糖、非消化性寡糖、化学益生素,是由2~10个单糖通过糖苷键连接形成直链或支链的一类糖,介于单体单糖与高度聚合的多糖之间。根据单糖分子种类、分子间结合位置和结合类型的不同,寡糖种类可达数千种以上。功能性寡糖主要是不能被pg电子app官网其它单胃动物自身分泌的酶和肠道有害菌分解利用,但能被肠道有益微生物利用的特殊糖类,如已研制出的产品有:壳寡糖、甘露寡糖、果寡糖、半乳甘露寡糖、异麦芽寡糖、寡乳糖、寡木糖、β-寡葡萄糖、低聚焦糖、反式半乳寡糖、大豆寡糖等,研究应用较多的是前三种寡糖。





(一)寡糖的类别、结构及其来源

1.壳寡糖(Chitooligosaccharide,COS)

壳寡糖(也称几丁寡糖,学名β-1,4-寡糖-葡萄糖胺)是指聚合度在2-20范围的氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖聚合物,如壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖等。壳寡糖是壳聚糖降解的低分子量产物,其水溶性大大增加,与壳聚糖相比,壳寡糖更易被生物体吸收而表现出更优越的生理活性,在抑菌、抗氧化、抗炎、调节血脂和血糖、抗肿瘤、增强免疫及活化肠道菌群中具有广泛的应用。目前,壳寡糖来源于壳聚糖的降解,主要有酸解法、氧化降解法和酶解法。壳聚糖是甲壳素的N-脱乙酰化产物(脱乙酰度大于55%),其单糖结构单元主要为2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖和少量的N-乙酰氨基葡萄糖。目前,壳聚糖已被广泛应用于多个领域:(1)在农业领域,可作为粮食和蔬菜作物种子的处理剂,激发种子提前发芽,提高作物产量;(2)在食品领域,对多种蔬菜和水果具有明显的保鲜、防腐作用;(3)在医药领域,具有降血脂、提高机体免疫力、促进伤口愈合等多种功效;(4)在水净化处理应用领域,可用做重金属螯合剂和絮凝剂来净化自来水或处理重金属工业废水。


2.甘露寡糖(Mannoseoligosaccharides,MOS)

最初发现MOS是在魔芋粉的硫酸水解液中。甘露寡糖是甘露糖之间或甘露糖与葡萄糖之间通过ɑ-1,2、ɑ-1,3、ɑ-1,6或β-1,3、β-1,4糖苷键连接而成的一种低聚糖,主要来源于魔芋精粉、甜菁胶和微生物细胞壁。目前,人用保健品甘露寡糖主要来源于魔芋,其纯度在 35%~55%;动物营养领域应用的甘露寡糖添加剂,主要是从废弃的啤酒酵母细胞壁中提取。酵母细胞壁质地坚硬,其重量占酵母细胞干重的18%~25%,厚度为0.1~0.3μm,可分为3层,外层主要组分为甘露聚糖,约占酵母细胞壁干重的30%,由约50个甘露糖通过ɑ-1,6糖苷键相结合组成;中间层主要组分为蛋白质和几丁质;内层主要组分为β-葡聚糖,约占酵母细胞壁干重29%~64%,由10~20个单糖通过β-1,3/1,6糖苷键相结合组成,呈螺旋形的立体分子结构,能对免疫系统引起刺激作用,在动物体内,不可溶、不可吸收、不产生黏性、耐酸、耐高温。


3.果寡糖(Fructooligosaccharide,FOS)

果寡糖,又名低聚果糖,是蔗糖分子和D-果糖分子以β-1,2糖苷键相结合所形成的一组寡聚糖的总称,结构式表示为G-F-Fn(G为葡萄糖,F为果糖,n=1~3)。根据蔗糖分子连接1D-果糖、2个D-果糖、3个D-果糖形成的寡糖分别称为果寡三糖(GF2)、果寡四糖(GF3)、果寡五糖(GF4)。果寡糖广泛存在于大麦、小麦、黑麦、洋葱、大蒜、马铃薯、菊芋等植物中。


(二)寡糖在机体内的作用机理

1.寡糖对肠道菌群的调节作用

哺乳动物对碳水化合物的消化仅限于ɑ-1,4糖苷键,因此,由ɑ-1,2、ɑ-1,3、ɑ-1,6或β-1,3、β-1,4糖苷键连接的低聚糖能抵抗动物机体消化酶的降解,直接进入小肠后端和大肠,被双歧杆菌、乳酸杆菌等有益微生物作为营养基质,最终被降解为短链脂肪酸、乳酸和二氧化碳等。体外试验均证实以FOS为唯一碳源时,沙门氏菌不能生长


病原菌必须通过表面的外源凝集素与动物肠粘膜表面的D-甘露糖受体结合后才能在消化道定植。MOS正是通过结合位点的方式发挥抑菌作用。一方面,MOS能竞争性结合肠上皮细胞的特异位点,通过占位方式从而抑制病原菌与肠粘膜的结合,另一方面,MOS含有D-甘露糖的相似受体,可以结合病原菌,从而阻止病原菌吸附到肠表面上,甚至使已结合到上皮细胞的大肠杆菌脱落下来,病原菌随着粪便一起排出体外


朱玉霞(2013)对壳寡糖的抑菌活性研究表明:在相同pH条件下,壳寡糖的脱乙酰度越高,对大肠杆菌抑制效果越好;在相同脱乙酰度的壳寡糖条件下,pH越低,其对大肠杆菌抑制效果越好。不同壳寡糖单体对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和尖孢镰刀菌的抑菌活性差别也较大,具体表现为:壳六糖最高(对镰刀菌抑制率为70.5%)、壳二糖最低(对镰刀菌抑制率为38.8%),氨基葡萄糖没有表现出抑菌活性。


2.寡糖对机体免疫防疫功能的调节作用

特异性免疫系统和非特异性免疫系统共同组成动物的免疫防御体系,其中,非特异性免疫是阻止病原菌侵入机体的第一道防线FOSMOS可以调节机体的细胞免疫和体液免疫功能。体外试验表明,MOS可以使血清中IgG和IgA浓度升高,提高B淋巴细胞数和白细胞介素2、γ-干扰素水平。FOS能显著提高T淋巴细胞转化功能和NK细胞的杀伤力,提高新城疫抗体水平。概括来说,寡糖能在多条途径,多个层面对免疫系统发挥调节作用,不仅能激活各类型的免疫细胞,还能活化补体,促进细胞因子的生成,增强红细胞免疫功能,同时,寡糖还能提高疫苗的保护力。


(三)寡糖在动物饲料中的应用研究

1.寡糖在水产饲料中的应用研究

刘含亮等(2012)研究壳寡糖对虹鳟生长性能、血清生化指标及非特异性免疫功能的影响,结果表明:200mg/kg壳寡糖不仅可显著提高特定生长率和增重率,显著降低饲料系数,而且极显著提高白细胞吞噬百分率、吞噬指数、血清杀菌百分率和溶菌酶活性。谭崇桂等(2013)研究MOS对凡纳滨对虾生长及血清非特异性免疫的影响,结果表明:0.4%MOS可显著提高对虾增重率12.78%,显著降低饲料系数0.09%;显著提高溶菌酶、碱性磷酸酶活力、超氧化物歧化酶活力,以及胃蛋白酶和肝胰脏脂肪酶活性。以上研究表明,寡糖对鱼虾的促生长作用,与其改善机体的免疫力和抗氧化能力有密切关系。


2.寡糖在猪饲料中的应用研究

黄俊文等(2005)研究表明:甘露寡糖与纳豆芽孢杆菌低剂量合用对改善断奶仔猪生产性能,降低腹泻率具有较好的协同作用,对仔猪的免疫和抗氧化机能有改善作用,体现在血清中CD3+CD4+水平显著提高,MDA含量显著降低,GSH-Px活性显著增加。岳文斌等(2006)研究果寡糖和甘露寡糖对断奶仔猪免疫机能的影响,结果表明:寡糖组的仔猪免疫器官指数较金霉素和洛克沙生联用组(ABT组)大;与ABT组相比,寡糖组显著提高了IgA、IgG、IgM浓度。臧建军(2003)研究果寡糖和甘露寡糖对断奶仔猪生产性能影响,结果表明:FOS和MOS较抗生素可显著减少断奶仔猪腹泻发生率,增强机体的抗氧化能力,维持血浆渗透压和脂类物质正常水平;与抗生素相比,FOS和MOS降低血清甘油三酯水平,且以FOS的低脂效应较显著;与抗生素相比,FOS和MOS通过促进CD4+CD8+T淋巴细胞的分化、刺激断奶仔猪免疫器官的生长发育、提高血清免疫球蛋白A、G、M水平,最终增强了由T、B淋巴细胞介导的细胞免疫和体液免疫功能


3.寡糖在禽饲料中的应用研究

温若竹等(2011)利用PCR-DGGE技术探讨甘露寡糖对肉仔鸡肠道菌群稳定性及多样性的影响,结果表明:MOS促进了肠道乳酸杆菌等有益菌的生长,同时抑制梭菌属等有害菌的生长阎桂玲等2008)研究啤酒酵母源甘露寡糖对肉仔鸡肠道微生物及免疫机能的影响,结果表明:酵母源甘露寡糖显著地减少了盲肠内大肠杆菌和沙门氏菌的数量,显著地促进双歧杆菌的生长;显著提高了新城疫一免和二免后14d的抗体效价水平;显著提高了淋巴细胞对ConA的反应性及巨噬细胞的吞噬力;0.15%添加量对抑制肠道致病菌生长的效果最好,而0.1%添加量则更有利于提高免疫机能。胡彩虹等(2003)研究表明:在艾维因商品代肉仔鸡日粮中添加果寡糖(添加量为0.4%~0.8%),不仅能显著提高日增重、显著降低料重比,而且显著降低胸肌和肝脏的胆固醇水平,显著提高盲肠中乙酸、丙酸、丁酸和血浆中乙酸含量,显著增加盲肠中双歧杆菌和乳酸杆菌含量,显著降低大肠杆菌含量,显著提高粪便中胆汁酸和胆固醇含量。综合以上研究表明:寡糖对肉仔鸡的促生长作用,与其抑制有害菌的生长,促进有益菌的生长,从而改善了肠道的健康度有密切关系。


4.寡糖在反刍动物饲料中的应用

肖宇等(2012)研究外源寡糖对奶山羊血清生化指标和抗氧化指标的影响,结果表明:果寡糖可显著降低血清丙二醛和低密度脂蛋白胆固醇含量,显著提高血清中总蛋白和球蛋白含量;甘露寡糖可显著降低血清丙二醛含量和谷丙转氨酶活性,显著提高血清中球蛋白和血清磷含量;说明添加量为1%(以有效含量计)FOS和MOS能在一定水平上提高奶山羊的抗氧化能力,改善机体脂质代谢、蛋白质合成。戈婷婷等(2012)采用体外批次培养法研究功能性寡糖对锦江黄牛瘤胃发酵及微生物生长效率的影响,结果表明:MOS、FOS和大豆寡糖均显著增加培养液挥发性脂肪酸和菌体蛋白浓度,当MOS、FOS和大豆寡糖添加量在1.00%~1.20%时,能最大效率的促进瘤胃微生物的生长


(四)寡糖在农牧业中的应用前景


寡糖作为一种纯天然的可再生资源,是人类用之不竭的生物资源,其开发与应用具有深远的意义。例如,甲壳素(Chitin)主要存在于虾、蟹及昆虫等甲壳类动物的外壳、真菌(酵母、霉菌,香菇等)、藻类及高等植物的细胞壁中,生物合成量高达100亿吨/年,仅海洋生物的合成量就达到了10亿吨/年以上。因此,来源广泛、天然、无毒无残留、无副作用的功能性寡糖,是当今国内外结束抗生素pg电子app官网,开pg电子app官网色安全促长剂pg电子app官网的热点开发领域,在农牧业领域必将具有非常宽广的应用前景。


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